Раслінныя і патагенныя матэрыялы
Папуляцыя картаграфавання асацыяцыі сорга, вядомая як папуляцыя канверсіі сорга (SCP), была прадстаўлена доктарам Пэтам Браўнам з Універсітэта Ілінойса (цяпер у Каліфарнійскім універсітэце ў Дэвісе).Ён быў апісаны раней і ўяўляе сабой набор разнастайных ліній, пераўтвораных у неадчувальнасць да фотаперыяду і меншы рост, каб спрыяць росту і развіццю раслін у асяроддзі ЗША.У гэтым даследаванні было выкарыстана 510 ліній з гэтай папуляцыі, аднак з-за дрэннай усходжасці і іншых праблем з кантролем якасці не ўсе лініі былі выкарыстаны ў аналізе ўсіх трох прыкмет.У канчатковым выніку дадзеныя з 345 радкоў былі выкарыстаны для аналізу рэакцыі хітыну, 472 радкоў для рэакцыі flg22 і 456 для ўстойлівасці да TLS.B. cookieштам LSLP18 быў атрыманы ад доктара Берта Блюма з Універсітэта Арканзаса.
Вымярэнне адказу MAMP
У гэтым даследаванні выкарыстоўваліся два розныя MAMP: flg22 (каталог Genscript № RP19986) і хітын.Расліны сорга вырошчвалі ва ўстаўках, размешчаных на плоскасцях, запоўненых глебай (33% сумесі Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) у цяпліцы.Расліны палівалі за дзень да збору ўзораў, каб пазбегнуць лішняга ўвільгатнення лісця ў дзень збору.
Лініі былі рандомізаваны і, па матэрыяльна-тэхнічных прычынах, былі высаджаны партыямі па 60 ліній.Для кожнай лініі высаджвалі тры «гаршкі» па два насення на лінію.Наступныя партыі высаджвалі, як толькі была апрацавана папярэдняя партыя, пакуль не была ацэненая ўся папуляцыя.Два эксперыментальныя прагоны былі праведзены для абодвух MAMP з генатыпамі паўторна рандомізірованный ў кожным з двух прагонаў.
Аналізы ROS праводзіліся, як апісана раней.Карацей кажучы, для кожнай лініі па шэсць насення было пасаджана ў 3 розныя гаршкі.З атрыманых сеянцоў па аднастайнасці выбралі тры.Саджанцы, якія выглядалі незвычайна або былі значна вышэй або ніжэй, чым большасць, не выкарыстоўваліся.Чатыры ліставых дыска дыяметрам 3 мм былі выразаны з самай шырокай часткі 4-га ліста трох розных 15-дзённых раслін сорга.Адзін дыск на ліст з двух раслін і два дыскі з адной расліны, прычым другі дыск становіцца кантролем вады (гл. ніжэй).Дыскі асобна плавалі на 50 мкл H2O ў чорным 96-лункавым пласціне, зачынялі алюмініевай герметызацыяй, каб пазбегнуць уздзеяння святла, і вытрымлівалі пры пакаёвай тэмпературы на працягу ночы.На наступную раніцу быў зроблены рэакцыйны раствор з выкарыстаннем 2 мг/мл хемілюмінесцэнтнага зонда L-012 (Wako, нумар па каталогу 120-04891), 2 мг/мл пероксидазы хрэна (тып VI-A, Sigma-Aldrich, нумар па каталогу P6782) і 100 мг/мл хітыну або 2 мкМ Flg22.50 мкл гэтага рэакцыйнага раствора дадаюць у тры з чатырох лунак.Чацвёртая свідравіна была імітацыйным кантролем, у які быў дададзены рэакцыйны раствор без MAMP.Чатыры пустыя лункі, якія змяшчаюць толькі ваду, таксама былі ўключаны ў кожную пласціну.
Пасля дадання рэакцыйнага раствора люмінесцэнцыю вымяралі з дапамогай прылады для чытання мікрапланшэтаў SynergyTM 2 з некалькімі выяўленнямі (BioTek) кожныя 2 хвіліны на працягу 1 гадзіны.Счытвальнік пласцін праводзіць вымярэнні люмінесцэнцыі кожныя 2 хвіліны на працягу гэтай 1 гадзіны.Сума ўсіх 31 паказанняў была разлічана, каб атрымаць значэнне для кожнай лункі.Ацэначнае значэнне для адказу MAMP для кожнага генатыпу было разлічана як (сярэдняе значэнне люмінесцэнцыі трох эксперыментальных лунак - значэнне імітацыі лункі) мінус сярэдняе значэнне пустой лункі.Значэнні пустых лунак пастаянна былі блізкія да нуля.
Ліставыя дыскіNicotiana benthamiana, адна лінія сорга з высокай рэакцыяй (SC0003) і адна лінія сорга з нізкай рэакцыяй (PI 6069) таксама былі ўключаны ў якасці кантролю ў кожную 96-лункавую пласціну для мэт кантролю якасці.
B. cookieпадрыхтоўка прышчэпкі і прышчэпка
B. cookieпасяўной матэрыял быў падрыхтаваны, як апісана раней.Карацей кажучы, збожжа сорга замочвалі ў вадзе на тры дні, прамывалі, зачэрпвалі ў 1-літровыя канічныя колбы і автоклавировали на працягу гадзіны пры 15 фунтаў на квадратны дюйм і 121 °C.Затым збожжа засяваюць прыкладна 5 мл мацерированного міцэлію са свежай культурыB. cookieLSLP18 вылучаюць і пакідаюць на 2 тыдні пры пакаёвай тэмпературы, боўтаючы колбы кожныя 3 дні.Праз 2 тыдні заражаныя грыбком збожжа сорга сушылі на паветры і захоўвалі пры тэмпературы 4 °C да палявой інакуляцыі.Адзін і той жа пасяўной матэрыял выкарыстоўваўся на працягу ўсяго выпрабавання і штогод рабіўся свежым.Для прышчэпкі 6-10 заражаных зерняў змяшчалі ў калатоўку раслін сорга ва ўзросце 4-5 тыдняў.Спрэчкі, атрыманыя з гэтых грыбоў, ініцыявалі заражэнне ў маладых раслінах сорга на працягу тыдня.
Падрыхтоўка насення
Перад пасадкай у поле насенне сорга апрацоўвалі сумессю фунгіцыдаў, інсектыцыдаў і ахоўных сродкаў, якая змяшчае ~ 1% фунгіцыду Spirato 480 FS, 4% фунгіцыду Sebring 480 FS, 3% фунгіцыду Sorpro 940 ES.Затым насенне сушылі на паветры на працягу 3 дзён, што забяспечвала тонкае пакрыццё гэтай сумесі вакол насення.Захавальнік дазволіў выкарыстоўваць у якасці даўсходавай апрацоўкі гербіцыд Дуал Магнум.
Ацэнка ўстойлівасці да мэтавай плямістасці лісця
SCP быў высаджаны на Цэнтральнай навукова-даследчай станцыі сельскагаспадарчых культур у Клейтане, штат Паўночная Караліна, 14–15 чэрвеня 2017 г. і 20 чэрвеня 2018 г. у рандомізірованном поўным блочным дызайне з двума эксперыментальнымі паўторамі ў кожным выпадку.Эксперыменты высаджвалі ў 1,8 м у адзінкавыя шэрагі з шырынёй міжраддзяў 0,9 м з выкарыстаннем 10 насення на ўчастак.Два бардзюрныя шэрагі былі пасаджаны па перыферыі кожнага эксперыменту, каб прадухіліць краёвыя эфекты.Эксперыменты былі прышчэплены 20 ліпеня 2017 г. і 20 ліпеня 2018 г., калі расліны сорга знаходзіліся на стадыі росту 3. Ацэнкі прымаліся па шкале ад аднаго да дзевяці, дзе расліны, якія не выяўлялі прыкмет захворвання, ацэньваліся як дзевяць і цалкам мёртвыя расліны ацэньваліся як адна.Дзве ацэнкі былі зроблены ў 2017 годзе і чатыры паказанні ў 2018 годзе, пачынаючы з двух тыдняў пасля прышчэпкі кожны год.sAUDPC (стандартызаваная плошча пад крывой прагрэсавання захворвання) разлічвалі, як апісана раней.
Час публікацыі: 1 красавіка 2021 г